pcDNA3.1(+) Seamless Cloning Kit（線性化質粒）

商品屬性：

產品名稱	規格	貨號
pcDNA3.1(+) Seamless Cloning Kit（線性化質粒）	20 μl	BJ-PJ6545

商品介紹：

產品介紹：
pcDNA3.1(+)載體為哺乳動物細胞表達載體，具有人巨細胞病毒(CMV)啟動子，在哺乳動物細胞中高水平表達；新霉素抗性基因，用于選擇穩定細胞系。本產品提供pcDNA3.1(+)經EcoRⅠ酶切后的線性化載體，可用無縫克隆技術將單個或多個DNA片段組裝到載體上。
無縫克隆技術可在重組酶的作用下，只需一步反應，便可將片段克隆到任何載體中的任意位置，得到重組質粒。無縫克隆技術作為一種非常強大的克隆技術，具有快速、簡便、高效、多片段組裝和定向克隆等特點，用于單個 DNA 片段的克隆，多個 DNA 片段組裝克隆以及多位點突變構建等實驗目的。
產品特點：
1. pcDNA3.1(+)具有人巨細胞病毒(CMV)啟動子，在哺乳動物細胞中高水平表達。
2. pcDNA3.1(+)具有新霉素抗性基因，用于選擇穩定細胞系。
3. pcDNA3.1(+)經EcoRⅠ酶切后的線性化載體，省時省力。
4. 無縫克隆技術只需要簡單的 PCR 擴增就可以制備片段DNA。
5. 可以克隆長片段和多片段DNA。
操作步驟：
1. pcDNA3.1(+)線性化載體使用方法：
(1) pcDNA3.1(+)線性化載體當做克隆載體使用，可以在擴增PCR產物的
上游引物 5’端添加序列：TAGGGAGACCCAAGCTGGCTAGCgccacc（gccacc為Kozak序列）
下游引物 5’端添加序列：CACTGTGCTGGATATCTGCAGAATTC
通過無縫克隆連接到pcDNA3.1(+)中。
(2) 測序引物
pcDNA3.1-F:CTAGAGAACCCACTGCTTAC
pcDNA3.1-R(BGH-R):TAGAAGGCACAGTCGAGG
(3) pcDNA3.1(+)線性化載體為 EcoRⅠ酶切后的線性化載體，圖譜及多克隆位點見下圖。