HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead(紫綠變色凍干球)

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號(hào)
HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead(紫綠變色凍干球)	100Tx25μl	BJ-PJ6576

商品介紹：

描述：

該制品為全體系凍干微球制品，包含了 HotStartBst4.2 DNA/RNA 聚合酶、Helicaser、dNTP、Mg2+、反應(yīng)緩沖、L-HNB 變色指示劑(Leuco-HNB, 隱色 HNB 染料)，其它穩(wěn)定劑。

Bst4.2 具有以下性能：

（1）Bst 4.2 全系包含熱啟動(dòng)
Aptamer，該配體確保酶在<30℃時(shí)，酶活封閉效率>95%,在>60℃時(shí) 1min 內(nèi)完全釋放酶活。該特性利于室溫建立反應(yīng)體系，并大幅降低了低溫條件下的非特異擴(kuò)增；

（2）反應(yīng)溫度提升到 70℃，大幅降低引物 Dimer 的形成，提高擴(kuò)增特異性，并使得粗樣品核酸釋放更加充分；

（3）全系包含 Helicaser，因此，允許在不使用 F3/B3 引物的情況進(jìn)行 LAMP 擴(kuò)增（easy LAMP），并允許 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。這將進(jìn)一步降低非特異擴(kuò)增，并使得擴(kuò)增均一性大幅提升。制品中的 L-HNB 染料在反應(yīng)起始前與 Mg2+結(jié)合產(chǎn)生深紫羅蘭色，隨著 LAMP 反應(yīng)的進(jìn)行，產(chǎn)生的 PPi（無(wú)機(jī)焦磷酸鹽）結(jié)合體系中的 Mg2+，使得 L-HNB 顯示出淡綠色。(L-HNB-Mg2+復(fù)合物) -> (PPi-Mg2+)+ (L-HNB)深紫羅蘭色 淡綠色

儲(chǔ)存：-20℃干燥密封保存 24 個(gè)月；室溫（25℃）密封保存 12 個(gè)月。避免受潮。
特殊說(shuō)明：
（1） Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 擴(kuò)增時(shí)的推薦反應(yīng)溫度為 65-70℃，最佳反應(yīng)溫度為 70℃。因此其可完全替代  的 Bst4.0 系列，用于標(biāo)準(zhǔn) LAMP的擴(kuò)增。
（2） 由于 Helicaser 的反應(yīng)溫度為 70℃，因此在進(jìn)行eLAMP 擴(kuò)增時(shí)，反應(yīng)溫度為 70℃。
（3）制品中包含高濃度的鹽組分，使用時(shí)做好個(gè)人防護(hù)，防止制品與皮膚、眼、鼻、呼吸道等接觸和吸入，一旦接觸或吸入，請(qǐng)用大量的清水洗。
（4）防止氣溶膠污染，盡可能進(jìn)行分區(qū)操作。
1. 標(biāo)準(zhǔn) LAMP 和 eLAMP 擴(kuò)增的區(qū)別本試劑既可以用于標(biāo)準(zhǔn) LAMP 擴(kuò)增，也可以用于 eLAMP擴(kuò)增。
1.1 10x 標(biāo)準(zhǔn) LAMP Primer MixFIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4 μM each; F3/B3=2 μM each
1.2 10xeLAMP Primer MixFIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each
注意：eLAMP（easy LAMP）為去除 F3/B3 引物的方法，為 Bst4.2 系列專用的使用策略，對(duì)于大多數(shù)引物組，在Helicaser 的加持下，擴(kuò)增度幾乎不受影響。如引物擴(kuò)增效率低，可提高 FIP/BIP 濃度到 12~16 μM。
1.3 擴(kuò)增溫度不同標(biāo)準(zhǔn) LAMP 擴(kuò)增 eLAMP 擴(kuò)增65-70°C 均可 70°C 反應(yīng)
2. 配制 LAMP 反應(yīng)體系HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead 1 個(gè)
10x Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μlddH2O 到總體積 25 μl反應(yīng)體系配好后，置于 65-70°C 反應(yīng) 20~30min，反應(yīng)完畢后觀察顏色，紫色為陰性，綠色為陽(yáng)擴(kuò)增。
注意事項(xiàng)：
（1）本制品在 1x 濃度情況下，對(duì)如下試劑的耐受度，Tris-HCl（pH8.0）≦10 mM; NaOH≦1 mM; Tween20%≦1%； EDTA(pH8.0) ≦20 μM； 肝素≦0.5 IU/ml。
（2）L-HNB 是還原狀態(tài)下的染料，任何強(qiáng)氧化劑（H2O2、次氯酸鈉等）均會(huì)破壞 L-HNB 的結(jié)構(gòu)，從而直接導(dǎo)致試劑變?yōu)樯钏{(lán)綠色。